فیلترهای نایلونی برای دور زدن بسیاری از مشکلات ذاتی نیتروسلولز ساخته شده اند و تا حد زیادی جایگزین نیتروسلولز برای اکثر برنامه های معمول بلات اسید نوکلئیک شده اند شاید مهمترین مزیت مرتبط با استفاده از آنها این باشد که این غشاها استحکام کششی زیادی از خود نشان می دهند.
این امکان مدیریت بسیار قاطعانه فیلتر و بررسی مکرر همان فیلتر را فراهم می کند فیلترهای نایلون طرح دار فانتزی به طور گسترده در آزمایشگاه بیولوژی مولکولی مورد استفاده قرار می گیرند و با نام های تجاری مختلفی به فروش می رسند آنها به دو دسته تقسیم می شوند: آنهایی که دارای بار سطحی خنثی هستند که نام باستانی آنها نایلون 66 است و آنهایی که بار مثبت خالصی دارند که توسط آمین های سطحی ایجاد می شود.
این دومی اغلب به عنوان فیلترهای نایلون مشکی دسته دار اصلاح شده با شارژ نامیده می شود و به عنوان نایلون (+) نشان داده می شود، که بسته به سازنده با چگالی شارژ متفاوت در دسترس هستند.
فیلترهای نایلونی که برای لکه کردن استفاده می شوند در اندازه های منافذ 0.2μm و 0.45μm موجود هستند، مانند نیتروسلولز فیلترهای نایلونی، به ویژه انواع نایلون (+)، همچنین ثابت کرده اند که با فناوری های مرتبط با نورتابی شیمیایی سازگار هستند.
غشاهای نایلونی ظرفیت اتصال اسید نوکلئیک افزایش یافته را در مقایسه با نیتروسلولز نشان می دهند، در برخی موارد به اندازه 400-500 میکروگرم بر سانتی متر مربع، بسته به سازنده و بافرهای دقیق مورد استفاده توسط محقق.
از آنجایی که غشاهای نایلونی میل خاصی به مولکول های اسید نوکلئیک کوچکتر (500 باز) نشان می دهند، بلات معمولی مولکول های کوچک مانند محصولات PCR را می توان به راحتی انجام داد.
در مقایسه با نیتروسلولز، بافرهای انتقالی که در رابطه با فیلترهای نایلون سفید دسته دار استفاده می‌شوند، از قدرت یونی کمتری برخوردار هستند، اغلب به اندازه 5× SSC یا 5× SSPE.
در حالی که بار مثبت مرتبط با غشاهای نایلونی (+) مطمئناً جاذبه الکترواستاتیکی بین RNA هدف و غشا را افزایش می‌دهد، مسدود شدن کافی غشاء در طول هیبریداسیون اولیه و در صورت امکان، در طول فرآیند تشخیص معمولاً لکه‌هایی با پس‌زمینه فوق‌العاده تمیز ایجاد می‌کند.
با این حال، شکست در پیش هیبریداسیون یا مسدود کردن مناسب، مطمئناً به دلیل تعامل غیر اختصاصی بین غشای با بار مثبت و ستون فقرات فسفودی استر با بار منفی، پس‌زمینه بیش از حد ایجاد می‌کند.
هنگامی که بر روی غشاهای نایلونی لکه می‌شود، به محقق عرض جغرافیایی بسیار بیشتری داده می‌شود تثبیت اسیدهای نوکلئیک را می توان با پخت و یا با تابش نور UV انجام داد پخت فیلترهای نایلونی نیازی به کوره خلاء ندارد و می توان آن را در هر وسیله ای که قادر به ایجاد دمای 65 تا 70 درجه برای مدت 1.0 تا 1.5 ساعت باشد، انجام داد.
بهترین از همه این است که فیلترهای نایلونی در هنگام پخت شکننده نمی شوند و در برابر کاوش مکرر بسیار بهتر از نیتروسلولز مقاومت می کنند.
در نهایت، گزارش شده است که فیلترهای نایلون دسته دار خانگی پاره شده را می توان با جوش نقطه ای آنها با یک ابزار فلزی داغ مانند حلقه تلقیح باکتریایی یا قلم لحیم کاری تعمیر کرد.
در این آزمایشگاه، فیلترهای نیمه پاره شده معمولاً به پس زمینه کمک نمی کنند با پیچاندن فیلتر در پوشش پلاستیکی، طرف های مجاور پارگی فیلتر معمولاً در فیلم اشعه ایکس زیر قابل توجه نیستند.
- منابع:
- تبلیغات:
